宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐应用

    D-荧光素钾盐是一种化学品。中文别名:(S)-4,5-二氢-2-(6-羟基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸钾盐英文别名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt产品描述D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域，特别是体内活题成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素底物能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的慢病毒转染入细胞后构建稳定表达细胞株，构建原位肿大的瘤模型，之后注入荧光素底物，通过IVIS系统来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或进行药物药效评价等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。注：在抗肿大的瘤药物药效评价试验中，由于生物自发光检测需要根据荧光素表达标定肿大的瘤大小，受肿大的瘤生长所发生的肿大的瘤内部坏死影响，生物自发光并不能很覆盖面广的评价肿大的瘤生长，在抗肿大的瘤药效评价有较高要求的实验中，建议使用小动物核磁成像系统检测肿大的瘤生长。D-荧光素也常用于体外研究。D-荧光素钾盐的合作平台有哪些？宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐应用

    luciferin)的分子结构如右图所示：，在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，分子结构如右图所示，并产生长发生光现象。但是该底物荧光素以前大多依赖进口，产品价格昂贵。而且由于该产品容易降解、受潮影响使用效果。所以，需要国产化的方式生产，一方面可以降低成本，一方面可以增强使用效果。作者：科远迪链接：zhuanlan./p/来源：知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。D-luciferin，potassiumsalt荧光素产品说明书发光原理哺乳动物生物发光，一般是将Fireflyluciferase基因（由554个氨基酸构成，约50KD）即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，当细胞分裂、转移、分化时,荧光素酶也会得到持续稳定的表达。基因、细胞和活题动物都可被荧光素酶基因标记。将标记好的细胞接种到实验动物体内后，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素(D-luciferin，potassiumsalt，以下均简称荧光素)，即可在几分钟内产生长发生光现象。所发的光波长在540-600nm。这种酶在ATP，氧存在的条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光。宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐应用南京D-荧光素钾盐测试公司哪家便宜。

    在食品卫生领域由于ATP生物发光技术无需培养过程，操作简便、灵敏度高，数分钟内可得到结果，具有其它微生物检测方法无法比拟的优势，是目前检测微生物更快的方法。荧光素是更受欢迎的多功能生物荧光底物之一。在萤火虫和几种其它甲虫中发现了萤火虫荧光酶/荧光素。通过中间体dioxetanone介导作用，荧光素酶氧化ATPji活的荧光素。萤火虫荧光素酶在ATP的辅助下氧化荧光素产生荧光。这个反应发生的几秒内在560nm处的化学荧光达到更高峰，当荧光素和ATP都超量存在的条件下，发射光与荧光素酶的活性成比例关系。萤火虫荧光素酶很早以前就用于与抗体结合形成偶联物，作为免疫分析中用荧光素作为底物进行检测的标签。与HRP和碱性磷酸酶相比，荧光素酶不耐化学修饰。这个酶的一个特殊的优点是，除了高灵敏度外，在哺乳动物组织中内源性荧光素酶的活性很低。荧光素酶另一个重要的作用是用于卫生监测。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染，因为产生荧光所需的ATP存在于所以活ti生物中。这种类型的ATP生物荧光特性足以保证对食品表面的检测，无论是在加工制作工程中设备的污染还是产品的污染都能检出。D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物。

    荧光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。研究者利用基因工程已经使得小鼠、家蚕、马铃薯等一些生物可以合成荧光素酶。间接体外成像是一种强大的研究手段，可以对整个动物体中的细胞群落进行分析：将不同类型的细胞（骨髓干细胞、T细胞等）标记上（即表达）荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活ti观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如荧光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括影响在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。例如，荧光素酶可以被用于检测血库中所存血液中的红血球是否开始破裂。法医可以用含有荧光素酶的溶液来检测犯罪现场中残留的血迹。医院用荧光素酶的发光来发现特定的疾病。荧光素酶还可以作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中，例如，用于在转染过荧光素酶的细胞中检测特定启动子的转录情况或用于探测细胞内的ATP的水平；这一技术被称为报告基因检测法或荧光素酶检测法（LuciferaseAssay）。荧光素酶是一个热敏感蛋白，因此经常被用于研究蛋白热变性过程中热休克蛋白的保护能力。D-荧光素钾盐使用浓度怎么样？

    因此只有在活细胞内才会产生长发生光现象，并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。结构与性能荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，并产生长发生光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时，只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。(1)荧光素不会影响动物的正常生理功能。(2)荧光素是280道尔顿的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。(3)荧光素在体内扩散速度快，可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢，持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光，10min后强度达到稳定的更高点，在更高点持续约20~30min后开始衰减，约3h后荧光素排除，发光全部消失，更佳检测时间是在注射后15~35min之间；若进行荧光素静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg，即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。(4)观察时间的间隔没有更短限制，只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程。做D-荧光素钾盐的哪家便宜。宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐应用

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    每孔加入100μl养24h后，Luciferin使其终浓度为150μg/ml，PBS，再加入D-立即用活题成像系统检测，分析发光强度与细胞数之间的相关性。4)细胞生长曲线绘制MCF7-luc细胞和作为对照取表达荧光素酶的MCF-7细胞，接种于24孔板，接种密度为2×104/孔。细胞接种后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔细胞，用细胞计数仪测定细胞数。以细胞生长天数为横坐标，细胞数目为纵坐标，分别绘制两种细胞生长曲线。二．动物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周龄，体重（15±2）g，雌雄各3只。取对数生长期的MCF-7用PBS重悬为2．5×10/ml悬液，每只裸鼠左右背侧近腋部皮下接种100μl，共接种6只。接种后第5d采用德国BERTHOLD公司的活题成像系统检测信号强度。以后每5d观测一连续观测30d。观测前每只裸鼠戊巴比妥钠麻醉（计量为：35mg/kg体重），按150mg/kg体重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后，进行活题成像观察皮下肿大的瘤的生长情况，定量分析各时间点的荧光值。绘制肿大的瘤皮下生长曲线.MCF-7-luc细胞裸鼠皮下移植瘤的病理形态学观察MCF-7-luc细胞裸鼠皮下接种后25d，脱颈处死小鼠，取肿大的瘤组织，制成石蜡切片，切片厚度为3μm。宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐应用